Die Ionenaustauschchromatografie, abgekürzt IEX, ist eine beliebte Technik im Bereich Proteinaufreinigung. Es handelt sich um eine einzigartige Chromatografietechnik, die die kompetitive Bindung von Molekülen in Lösung auf der Grundlage ihrer relativen Bindung an eine ionische Festphase ausnutzt.
In diesem Blogbeitrag erklärt KNAUER die Prinzipien der Ionenaustauschchromatografie für FPLC-Anwendungen.
Einführung in die Ionenaustauschchromatografie
Die Ionenaustauschchromatografie wird zur Trennung von Proteinen basierend auf ihrer Ladung verwendet. Verschiedene Ionenaustauscher werden verwendet, um die adsorptiven Eigenschaften geladener Proteine an einer stationären Phase mit entgegengesetzter Ladung zu nutzen.
Die erste Stufe der Ionenaustauschchromatografie ist die Equilibrierung mit einem geeigneten Puffer, dessen pH-Wert die Nettoladung des Proteins beeinflusst. Bei einem bestimmten pH-Wert tragen alle geladenen Moleküle in Lösung eine Nettoladung nahe Null. Dies wird als ihr isoelektrischer Punkt (pI) definiert. Im Allgemeinen gilt:
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